2011年, 第38卷, 第01期　刊出日期：2011-01-20

  

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论著
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  双酚A及玉米赤霉烯酮对神经母细胞瘤细胞周期蛋白表达的影响

  郑继翠 马阳阳 刘江斌 肖现民△

  . 2011, 38(01): 1-5.

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  目的 探讨两种环境内分泌干扰物双酚A（bisphenol A，BPA）与玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞细胞周期素CyclinD1、CDK4、p21表达的影响。方法 SK-N-SH细胞经培养扩增后分为7组：组1，无干预（对照组）；组2，加17β-雌二醇（E2）；组3，加BPA；组4，加ZEA；组5，同时加E2和ICI 182，780；组6，同时加BPA和ICI 182，780；组7，同时加ZEA和ICI 182，780。在72 h用免疫细胞化学染色及Western blot分析法检测细胞周期蛋白CyclinD1、CDK4、p21的蛋白表达。结果 72 h时免疫组化和Western blot检测发现，组2、3、4中CyclinD1、CDK4的表达明显高于对照组和5、6、7组（P<0.05），p21在各组之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 BPA与ZEA可能通过调节细胞周期蛋白而影响SK-N-SH细胞的周期变化，从而促进其增殖。
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  DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达

  王上上 徐金华 施伟民△

  . 2011, 38(01): 6-9.

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  目的 检测系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）患者中DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）和CD11a基因的表达水平，探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法 用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组（P=0.014）和缓解期组（P=0.030）显著下降；缓解期的DNMT1表达水平与对照组（P=0.264）相比差异无统计学意义；SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数（SLE disease activity index，SLEDAI）呈现负相关（P<0.05）。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组（P=0.003）显著升高（P<0.05）；缓解期的CD11a表达水平与对照组（P=0.250）和缓解期组（P=0.069）相比差异无统计学意义（P>0.05）；SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关（P<0.05）。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性（P>0.05）。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因，使得CD11a等致病基因过度表达，进而导致SLE发病。
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  利多卡因经兔腹主动脉局部灌注减轻脊髓损伤的作用及剂量

  姚俊岩△ 许永富 张建海 王海涛 李士通

  . 2011, 38(01): 10-13.

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  目的 探讨利多卡因（lidocaine）经兔腹主动脉局部灌注减轻脊髓缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury，IRI）的作用及最佳保护剂量。方法 新西兰大耳白兔40只，随机分为5组（n=8）：生理盐水对照组（NS组）、利多卡因10 mg/kg组（L₁₀组）、利多卡因20 mg/kg组（L₂₀组）、利多卡因40 mg/kg组（L₄₀组）和利多卡因80 mg/kg组（L₈₀组）。全麻下开腹阻断左肾动脉远端的腹主动脉及双侧髂总动脉30 min，构建脊髓缺血模型，自缺血即刻起分别向阻断的腹主动脉段内灌注生理盐水（NS组）和不同剂量的利多卡因溶液（L₁₀~L₈₀组），持续30 min后停止，同时开放腹主动脉及双侧髂总动脉行再灌注，观察血液动力学变化，并于动物清醒即刻、再灌注6、24和48 h按Tarlov标准进行神经行为学评分。全麻下取出L₄~L₆脊髓，光镜下观察脊髓前角组织形态并计数正常运动神经元。结果与NS组比较，利多卡因组神经行为学评分及脊髓前角正常运动神经元计数均增高，其中L40组最高（P<0.05）。L80组有2例动物在腹主动脉开放后出现心率显著减慢。与其他各组比较，L80组再灌注期间平均动脉压降低（P<0.05）。结论 利多卡因经腹主动脉局部灌注可减轻兔脊髓IRI，其保护作用与剂量密切相关。利多卡因80 mg/kg将导致严重并发症，我们认为最佳保护剂量为40 mg/kg。
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  纳米羟基磷灰石/聚酰胺在脊髓型颈椎病椎体次全切减压融合术中的应用

  杨朝垒 王利民 谭洪宇 王卫东 廖文胜 鲍恒 刘屹林△

  . 2011, 38(01): 14-17.

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  目的 探讨纳米羟基磷灰石/聚酰胺（n-HA/PA66）在脊髓型颈椎病椎体次全切减压融合术中的应用效果。方法 对30例脊髓型颈椎病患者均行颈椎前路椎体次全切n-HA/PA66植入钛板内固定术，对其疗效及融合情况进行评价。结果 30例患者均成功完成手术并获得随访，随访时间9~17个月，平均12.6个月。所有患者神经症状均明显改善，植入物未引起过敏及毒性反应，颈椎生理曲度、椎间高度有良好的恢复和维持，术后6~8个月时获得植骨融合，n-HA/PA66人工椎体后缘存在不同程度的异位骨化。结论 n-HA/PA66人工椎体作为颈椎前路手术植骨材料融合率高，可以有效保持颈椎生理曲度及椎间高度。长期效果有待进一步观察。
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  造影剂所致大鼠急性肾损伤的远期影响

  吴天华▲ 吉俊▲ 刘红 邹建洲 滕杰 丁小强△

  . 2011, 38(01): 18-21.

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  目的 观察造影剂所致大鼠急性肾损伤的远期影响。方法 48只雄性SD大鼠经静脉注射消炎痛（10 mg/kg）和L-NG-硝基精氨酸甲酯（L-NAME 10 mg/kg）预处理，30 min后实验组大鼠（n=24）静脉注入复方泛影葡胺（DTZ 8 mL/kg）建立大鼠造影剂所致的急性肾损伤模型，对照组大鼠（n=24）缓慢推注生理盐水8 mL/kg。给药后24 h、1、2、3个月观察大鼠肾功能、肾组织病理学变化。结果 对照组和实验组血肌酐基线值无明显差异。实验组注射DTZ 24 h后，血肌酐与基线值相比明显升高［（48.02±5.53）μmol/L vs.（112.7±45.35）μmol/L，P<0.001］，肾组织病理改变以片状小管坏死和间质充血为主，尤以外髓明显；注射DTZ 3个月后，尽管血肌酐与基线值及对照组相比差异无显著统计学意义，但实验组仍存在明显的肾间质局灶性炎症细胞浸润，部分早期损害严重的小管被纤维组织所取代。结论 造影剂对大鼠肾脏造成的急性肾损伤并未完全恢复，而留下长期的慢性肾小管间质损伤。
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  阿奇霉素对哮喘患者诱导痰中细胞因子的影响

  朱柠 何剑 陈小东△

  . 2011, 38(01): 22-25.

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  目的 评价阿奇霉素对支气管哮喘患者诱导痰中细胞因子的影响及其安全性。方法 本实验40例哮喘患者，随机分为阿奇霉素联合吸入性糖皮质激素（inhaled cortisteroid，ICS）加长效β₂-肾上腺素受体激动剂（long-acting β₂-agonists，LABA）组（A组）和ICS加LABA组（B组），治疗12周后，用ELISA检测患者治疗前后诱导痰中细胞因子IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ的浓度变化，并评估阿奇霉素治疗的不良反应。结果 治疗12周后，两组患者的哮喘诱导痰细胞因子的浓度明显下降，差异有统计学意义；A组诱导痰标本内细胞因子浓度较B组明显下降，差异有统计学意义；两组均未出现严重的不良事件。结论 阿奇霉素联合ICS和LABA治疗哮喘安全有效，可有效降低气道炎症反应程度，调节Th1/Th2平衡。
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  携带IL-24的溶瘤腺病毒作用于乳腺癌的体外实验研究

  朱玮 秦新裕△ 张宏伟 陈君雪 吴红平 钱其军

  . 2011, 38(01): 26-31.

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  目的 构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24，评估CNHK600-IL-24在体外对乳腺癌细胞的杀伤能力。方法 将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-ΔCR2，与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至人胚肾293细胞，获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24。荧光显微镜观测及病毒体外增殖实验测评病毒在乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常成纤维细胞MRC-5中的增殖情况；MTT法检测不同MOI值的病毒对两种细胞的抑制效应；ELISA法检测病毒感染细胞后上清液中IL-24的含量；Western blot法检测细胞内的IL-24蛋白；流式细胞检测细胞的凋亡情况。结果 CNHK600-IL-24经测序及PCR鉴定，病毒滴度为1.9×10¹⁰ pfu/mL。CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后表现出强大的增殖、复制能力，而在MRC-5细胞内增殖并不明显；CNHK600-IL-24在很低的浓度就能对MDA-MB-231细胞产生明显的杀伤效应，而对MRC-5细胞的杀伤作用明显减弱；CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后，IL-24蛋白的表达明显增多，而感染MRC-5细胞后产生的IL-24维持在很低的水平。流式细胞检测发现，病毒引起的MDA-MB-231细胞明显凋亡而MRC-5细胞的凋亡率很低。结论 本研究成功构建高滴度的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24，该病毒具有在乳腺癌细胞中特异性增殖并杀伤肿瘤细胞的能力。
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  雄甾-4-烯-3,17-二酮11α羟化突变株Metarhizium anisopliae M28-203的代谢调控

  叶丽 周珮 冯美卿△

  . 2011, 38(01): 32-37.

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  目的 从营养代谢调控和转化条件控制两个方面入手提高雄甾-4-烯-3,17-二酮（androst-4-ene-3,17-dione，AD）11α羟化突变株Metarhizium anisopliae M28-203转化效率。方法 通过正交试验确定发酵培养基配方，对影响转化的一系列因素如：pH、发酵时间、通气量、底物投料量及溶解性、细胞通透性进行控制，考察以上因素对羟化反应的影响，确定最佳转化条件。结果 该突变株培养基最佳配方为葡萄糖30 g/L、玉米浆20 g/L、蚕蛹粉5 g/L、硫酸铵2.5 g/L、磷酸氢二钾1 g/L、硫酸镁0.5 g/L和硫酸亚铁0.02 g/L。在pH 6.0~6.5、菌龄48~60 h、250 mL摇瓶装液量为30和40 mL、转化时间72 h时能取得最佳转化效果。在底物投料量为2 mg/mL时，采用4%无水乙醇溶解底物或加入0.75 mg/mL Tween 80均有利于羟化反应，在以上优化条件下转化率分别达到62.5%和66.8%。结论 突变株Metarhizium anisopliae M28-203能有效地在AD上引入11α羟基，为工业生产依普利酮及其他甾体药物提供关键中间体。
实验研究报道
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  聚肌胞联合E7(44-62)增强自然杀伤细胞抗子宫颈癌免疫的实验研究

  黄宇琨 邱氟△

  . 2011, 38(01): 38-41.

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  目的 探讨聚肌胞联合E7(44-62)刺激对自然杀伤细胞（natural killer cell，NK细胞）的影响。方法 NK92细胞分别给予培养液（C组）或聚肌胞（聚肌胞组）或聚肌胞联合E7(44-62)（联合组）刺激；检测刺激前后的NK92细胞的Toll样受体3、TNF-α和INF-γ mRNA水平以及肿瘤细胞杀伤活性。结果 刺激1 h后，联合组的Toll样受体3表达明显高于C组和聚肌胞组；刺激1 h后，联合组的TNF-α mRNA水平显著高于C组和聚肌胞组（P均<0.01）；联合组的INF-γ mRNA水平显著高于C组和聚肌胞组（P均<0.05）；刺激24 h后，联合组NK92细胞的肿瘤细胞杀伤活性显著高于C组和聚肌胞组（P均<0.01）。结论 聚肌胞联合E7(44-62)通过提高NK92细胞的Toll样受体3表达，同时增加TNF-α和INF-γ基因的水平，从而增强抗肿瘤反应。
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  工程化同种胰岛移植治疗1型糖尿病小鼠的实验研究

  顾晓 杨进 赵鸿△ 周广臣

  . 2011, 38(01): 42-46.

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  目的 将外源蛋白FasL修饰的供者胰岛移植于糖尿病小鼠肾包膜下，观察其治疗1型糖尿病的效果。方法 采用ProtExTM技术将嵌合蛋白SA-FasL修饰于供者小鼠胰岛，流式细胞检测蛋白的表达；以近交系小鼠BALB/c和C57BL/6分别为胰岛移植的供受者，进行同种小鼠胰岛移植，部分受者联合免疫抑制剂雷帕霉素（rapamycin，RPM）治疗，从手术当日开始应用RPM（0.2 mg/kg），连续治疗10天。根据移植胰岛的不同及有无联合RPM治疗将受者分为5组：(1) SA-FasL修饰组（FasL组，n=33）；(2) SA-FasL修饰+RPM治疗组（FasL-RPM组，n=31）；(3) SA修饰组（SA组，n=27）；(4) SA修饰+RPM治疗组（SA-RPM组，n=30）；(5)未修饰胰岛组（Islet组，n=20）。术后连续3天测定血糖，其后每周测定尿糖3次。若受者尿糖阳性并连续2天血糖≥250 mg/dL为移植排斥反应，尿糖阴性超过100天为移植胰岛长期存活。结果 激光共聚焦显微镜观察生物素呈绿色，FasL蛋白呈红色表达于胰岛表面，胰岛细胞的平均生物素化效率为（90.8±0.9）%，FasL蛋白平均表达率为（82.6±2.2）%。FasL组中28%受者的移植胰岛获得长期存活，联合应用RPM之后（FasL-RPM组）长期存活率提高到92%，两组间差异有显著统计学意义（P<0.05）；SA组于术后25天全部受者均发生排斥反应，移植胰岛平均存活时间（mean survival time，MST）为（16±1.5）天，联合应用RPM之后（SA-RPM组）21%受者的移植胰岛获得长期存活，但显著低于FasL-RPM组的存活率（P<0.05）。Islet组于术后22天全部受者均发生排斥反应，移植胰岛MST为（14±1.7）天。结论 表达FasL嵌合蛋白的工程化胰岛移植于糖尿病小鼠并联合短程免疫抑制剂治疗，有可能诱导移植胰岛长期存活，对1型糖尿病的治疗具有潜在的临床意义。
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  黄芪皂甙与丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后生长因子表达的影响

  李宏云 陈世益△ 张健 李云霞 陈疾忤 华英汇

  . 2011, 38(01): 47-50.

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  目的 观察黄芪皂甙和丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中生长因子表达的影响。方法 96只雄性Wistar大鼠（体重180~200 g）随机分为A组（正常对照组）、B组（生理盐水对照组）、C组（黄芪皂甙组）、D组（丹参酮ⅡA组）、E组（黄芪皂甙+丹参酮ⅡA组）、F组（黄芪丹参注射液组），每组16只。采用打击装置造成右侧腓肠肌中段钝挫伤模型，分别于损伤局部注射相应药水，并于损伤后4、7、14和28天，进行腓肠肌损伤部位取材。正常对照组不进行打击伤，同时也不注射任何药物。Western blot方法检测各组血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）及胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor-1，IGF-1）表达量的变化。结果 与正常对照组相比，各干预组VEGF、bFGF、HGF、IGF-1表达均明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），骨骼肌钝挫伤后生长因子升高的情况一直持续到伤后第28天；损伤各组之间生长因子表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 黄芪皂甙和丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中生长因子的表达无明显影响。
临床经验交流
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  原发性小肠肿瘤51例临床分析

  徐佶 李金明 来代莉 杨明 于恩达△

  . 2011, 38(01): 51-53.

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  目的 探讨原发性小肠肿瘤的临床特点和诊断手段。方法 回顾性分析51例原发性小肠肿瘤患者的临床资料。结果 51例原发小肠肿瘤中，良性肿瘤6例（11.8%），恶性肿瘤45例（88.2%）。恶性肿瘤中术后病理类型为腺癌20例，淋巴瘤14例，间质瘤10例，类癌1例。临床表现无特异性，最常见症状是消化道出血。51例患者均经手术治疗，术前诊断率为47.1%。45例恶性肿瘤根治性切除率为46.7%（21/45），其中37例获随访患者中，22例已死亡，平均生存期（30±14）个月。结论 小肠肿瘤临床表现不典型，早期诊断困难，对本病的警惕和认识有助于早期诊断和手术治疗。
方法技术
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  组织因子途径抑制物-2的时间分辨荧光免疫测定方法的建立及评价

  蒋芳林 刘静 王慧君 张进 罗心平 马端;△

  . 2011, 38(01): 54-59.

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  目的 建立测定血液中组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway-2，TFPI-2）含量的时间分辨荧光免疫测定方法（time-resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）。方法 以兔抗人TFPI-2多克隆抗体作为固相抗体，单克隆抗体3C8作为第一抗体，原核表达的人TFPI-2作为标准品，Eu3+标记的羊抗鼠单克隆抗体作为检测抗体，采用双抗体夹心法建立TFPI-2 TRFIA分析系统，并与酶联免疫吸附法（ELISA）进行比较。结果 自制TFPI-2 TRFIA试剂标准曲线的线性范围为0.1~50 ng/mL，灵敏度为0.048 ng/mL，批内和批间变异系数均≤8.39%。应用该方法测定56例冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease，CHD）患者及24例正常体检者血浆中的TFPI-2分别为（10.58±7.12）和（8.53±2.32）ng/mL。结论 我们建立的TFPI-2 TRFIA分析方法与 ELISA相比灵敏度更好，定量检测结果能够敏感准确地反映血液内TFPI-2的浓度变化，特异性和稳定性均符合要求。
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  NK4蛋白在大肠埃希菌中的表达、纯化、复性及活性测定

  常冰梅 刘晓军 李美宁 张悦红 程牛亮 牛勃△

  . 2011, 38(01): 60-65.

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  目的 在大肠埃希菌（E. coli）中高表达NK4蛋白，经鉴定、纯化、复性后测定其生物学活性。方法 采用重组DNA技术对已有质粒pGEX-4T-1-NK4和pBV220-HGFα进行改造，构建质粒pBV220-NK4，并使其转化E. coli BL21（DE3），温控诱导表达目的蛋白NK4。蛋白鉴定采用SDS-PAGE和Western blot；蛋白纯化采用包涵体超声破碎、洗涤和Sephacryl-S200凝胶过滤层析。经梯度稀释复性后，采用MTT法和免疫细胞化学方法检测重组蛋白NK4对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）ECV304增殖的作用。结果 重组质粒pBV220-NK4酶切图谱和序列测定与预期一致。SDS-PAGE显示有相对分子质量49 000的目的蛋白，表达量为30%。Western blot结果证实目的蛋白带有NK4的氨基端，经包涵体洗涤、层析后NK4的纯度为95%。复性后的NK4可抑制ECV304增殖，并抑制ECV304增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达。结论 我们建立了NK4的原核高表达体系及纯化制备工艺，所制备的NK4蛋白具有生物学活性，为大规模制备有活性的NK4及深入研究其相关功能奠定了基础。
综述
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  无创机械通气治疗阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的研究进展

  鲁沈源（综述）李善群△（审校）

  . 2011, 38(01): 66-70.

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  机械通气治疗阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）时最广泛应用的通气模式是持续气道正压（continuous positive airway pressure，CPAP），其在纠正OSAHS患者PSG监测指标、改善患者嗜睡等临床症状及降低炎症反应等方面效果显著，但缺点是患者依从性不佳。为改善患者的生活质量并提高患者的依从性，新的通气模式逐渐诞生并应用于临床，如C-flex CPAP、A-flex CPAP、双水平气道正压（bi-level positive airway pressur，BiPAP）等，本文就相关通气模式的发展及疗效进行综述和对比分析。
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  肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤血管生成和转移的研究进展

  徐建（综述）王艳红△（审校）

  . 2011, 38(01): 71-74.

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  巨噬细胞起源于血液单核细胞，在不同的刺激因素作用下，巨噬细胞可分化为经典激活的巨噬细胞（M1型）和选择性激活的巨噬细胞（M2型）。现在认为，肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages，TAM）具有M2型巨噬细胞表型。TAM在肿瘤中大量浸润被认为是肿瘤患者预后不良的重要标志。TAM通过多种分子机制促进肿瘤血管生成和转移。本文就TAM促进肿瘤血管生成和转移的相关分子机制作一综述。
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  变应性鼻炎特异性免疫治疗新进展

  唐鸣（综述）赵霞△（审校）

  . 2011, 38(01): 75-79.

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  变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是一种由于特应性个体接触致敏原后由IgE介导的鼻黏膜慢性炎症反应性疾病。该病的治疗方法多种多样，但却难以达到临床治愈的目的。随着免疫学的不断发展，由于特异性免疫治疗（specific immunotherapy，SIT）的高安全性和可靠疗效,渐渐成为AR的重要治疗手段之一。本文针对近年来流行的两种特异性免疫治疗方法的产生背景、机制、疗效及安全性进行综述。
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  维生素D与糖尿病

  许桂平（综述）于明香△（审校）

  . 2011, 38(01): 80-83.

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  维生素D是一组内分泌激素，近年来的研究发现维生素D缺乏与1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病及其他类型糖尿病之间均存在着密不可分的关系。维生素D通过抑制炎症反应、抑制自身免疫反应、促进胰岛素合成及分泌、增加胰岛素敏感性及维生素D相关基因多态性等多种作用机制对糖尿病的发病及血糖的控制发挥着重要作用。
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  RNA干扰技术及其在椎间盘退变研究中的进展

  朱斌（综述）吴靖平△（审校）

  . 2011, 38(01): 84-88.

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  RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来发展起来的一种新兴的基因沉默技术，它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后的沉默机制。RNA干扰序列特异性的抑制效应较反义DNA、抗体封闭技术等传统基因调节方法有着明显的优势。在哺乳动物细胞中，RNAi可由21~25个核苷酸长度的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）介导完成,近年来已发展为研究基因功能的重要工具。在后基因时代，RNAi在基因功能研究和基因药物开发中具有广阔的应用前景，目前已被广泛应用于肿瘤及神经退行性疾病等研究中。现就RNAi的发展及其在椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IVDD）研究中的进展做一综述。
临床病例讨论
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  心脏介入治疗术后血小板减少及血栓形成

  陈允钦 颜彦△ 崔洁 唐斌 王齐兵 钱菊英

  . 2011, 38(01): 89-92.

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个案报告
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  纵隔囊性淋巴管瘤1例

  林之枫△ 黄海龙 张宜玲

  . 2011, 38(01): 93-94.

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