2008年, 第35卷, 第3期　刊出日期：2008-05-20

  

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论著
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  醛糖还原酶(AR)参与大鼠MsC表达iNOS和NO及其调控机制的研究

  瞿俊杰 蒋涛 林伊凤 李慧 陈琦 张农△

  . 2008, 35(3): 319-0.

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  目的 采用醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitor，ARI)抑制醛糖还原酶(aldose reductase，AR)活性，观察其对大鼠系膜细胞(MsC)在肿瘤坏死因子(TNFα)作用后表达诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthesis，iNOS)的影响，并对这一现象进行初步的机制探讨。方法 实验分为对照组、Sorbinil作用组、Zopolrestat作用组。分别采用NO测试盒检测亚硝酸盐含量；免疫荧光、Western Blot检测iNOS表达；Real-Time PCR检测iNOS mRNA，对比正常生长MsC及ARI(Sorbinil和Zolporestat)预处理的MsC在TNFα作用不同时间后上述指标的变化。分别采用非放射性标记的分光光度检测法检测转录因子NFκB p65亚基试剂盒(Colorimetric Nonradioactive NFκB p65 Transcription Factor Assay Kit)以及Western Blot 的方法对以上各组细胞进行转录因子NFκB活性检测，及其上游通路IκB信号通路活化情况检测。 结果 与正常MsC相比，TNFα可上调培养大鼠MsC中iNOS mRNA和蛋白的表达，以及NO合成水平，但此作用可以被两种ARI不同程度地抑制；抑制TNFα导致的NFκB的活化及IκBα信号通路的磷酸化，并具有一定的时间相关性。 结论 AR参与调控TNFα诱导iNOS表达上调的过程，且此调控可能是通过影响转录因子NFκB的活性以及上游信号通路的活化而实现的。
  
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  hand2 基因对斑马鱼胚胎发育影响的实验研究

  孙淑娜 桂永浩△ 宋后燕 蒋璆 王跃祥

  . 2008, 35(3): 325-0.

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  目的 观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况，验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸（Morpholino oligonucleotides，MO）使hand2 表达下调的有效性。观察hand2 表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型，初步探讨hand2在斑马鱼胚胎发育中的作用，为利用斑马鱼开展hand2的功能研究提供线索。 方法 采用胚胎整体原位杂交的方法观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况。利用向斑马鱼受精卵显微注射MO的方法使hand2 表达下调，并进行hand2 表达下调的效率验证。将斑马鱼单细胞受精卵分为四组进行显微注射，即对照MO（Con MO）注射组、hand2 MO注射组、hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2 MO注射组。在荧光显微镜下观察hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2 MO注射组的荧光表达情况以验证hand2 表达下调的效率。在显微镜下观察hand2 MO注射组斑马鱼胚胎的各器官发育情况并进行评定。 结果 hand2在斑马鱼胚胎的侧板中胚层、咽弓、心脏和鳍有较强表达。hand2-GFP mRNA注射组在8hpf（hours post fertilization）时胚胎有较强的荧光表达，而hand2-GFP mRNA+hand2 MO注射组胚胎几乎无荧光表达。与Con MO注射组相比，hand2 MO注射组斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节有明显的发育异常。 结论 向斑马鱼受精卵显微注射hand2 MO的方法可有效的使 hand2表达下调。hand2 在斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节的发育过程中有重要作用。
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  CD40L在M2型巨噬细胞类型转换中的作用

  郭强▲△李康▲ 徐薇 关庆东 储以微 熊思东△▲

  . 2008, 35(3): 330-0.

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  目的 检测不同CD40L表达水平的脾细胞对巨噬细胞表型和功能的影响，探讨通过调控CD40L的表达改变巨噬细胞的类型。方法 贴壁分离正常BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞。将腹腔巨噬细胞或经IL-4刺激的腹腔巨噬细胞，分别与体外培养2日后获得的CD40Llow脾细胞和Ionomycin与PMA诱导的CD40Lhigh脾细胞共孵育，24h后检测M1和M2型巨噬细胞相关基因的表达，并以硝酸还原酶法检测NO分泌水平。结果 与CD40Llow脾细胞共孵育的巨噬细胞CCL22、Fizz1和Ym1表达水平较高，但只分泌较低水平的NO，而与CD40Lhigh脾细胞共孵育的巨噬细胞表达较高水平的CCL3并分泌高水平的NO，而且CD40Lhigh脾细胞可使M2型巨噬细胞表型相关基因明显下调。结论 CD40Lhigh脾细胞使巨噬细胞倾向于M1型极化，并且能使M2型巨噬细胞向M1型转换。
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  减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤基因治疗载体的低毒性和靶向性研究

  周易明 刘常星 邬剑华 王依婷 陈宗祐Δ

  . 2008, 35(3): 336-0.

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  目的 研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性。方法 将野生型沙门氏菌（对照组）和VNP20009（研究组）分别通过尾静脉注射感染正常小鼠，观察其生存期差别；将绿色荧光蛋白（，GFP）标记VNP20009，红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein，RFP）和GFP 分别标记小鼠前胃癌细胞（MFC）的胞质和胞核，尾静脉注射感染离体肿瘤细胞和荷瘤小鼠，以双色荧光成像的定性方法和组织匀浆细菌培养的定量方法显示细菌在离体肿瘤细胞、在体肿瘤和正常组织中的生长情况。结果 接受野生型沙门氏菌注射的对照组小鼠在注射后4d全部死亡，而接受VNP20009注射的研究组小鼠在注射后10d依然全部存活；VNP20009能在离体肿瘤细胞中持续增殖并引起核碎裂；在体实验中，感染后第6天，正常组织中的细菌明显减少，到第15天时几乎消失，但在肿瘤组织中依然持续增殖。细菌在肿瘤/正常组织(肝脏)中的比例在感染后第4天约为224：1，第6天为1020：1。结论 基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009有着良好的低毒性以及肿瘤靶向性，具有作为肿瘤基因治疗载体的潜力。
  
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  高脂血症小鼠心脏和肺组织中eNOS及HO-1的表达

  江一峰 曹晓娥△ 王丽 赵凤娣 殷莲华

  . 2008, 35(3): 342-0.

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  目的 观察高脂饲料喂养的小鼠心脏和肺组织中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric-oxide synthase, eNOS）及血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）的含量变化，探讨高脂血症对eNOS和HO-1表达的影响。方法 高脂饮食组（n=8）和普通饮食组（n=8）C57BL/6小鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养18周后，测血清总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）和低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）含量，采用Real-Time PCR检测心脏和肺组织中eNOS及HO-1的mRNA水平，以免疫组化方法检测其蛋白表达。结果 高脂饮食组TC、TG和LDL明显高于普通饮食组，HDL则低于普通饮食组；高脂饮食组心脏和肺组织中eNOS的mRNA和蛋白水平低于普通饮食组，HO-1的mRNA和蛋白水平高于普通饮食组。结论 高脂饲料喂养能使小鼠形成高脂血症，并引起心脏和肺组织中eNOS的表达降低，同时HO-1的表达升高。
  
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  DNA修复基因XRCC1密码子194多态性与肺癌易感性研究

  苏佳;牛润贵 韩小友 史建平 刘力 李家伟 卫国荣 陈传炜 俞顺章 张作风 穆丽娜△

  . 2008, 35(3): 348-0.

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  目的 研究DNA修复基因XRCC1密码子194多态性与肺癌易感性的关系，并探索其与吸烟可能的交互作用。方法 采用病例-对照研究,收集原发性肺癌患者396例为病例组,同时抽取465名当地健康居民作为对照组,进行流行病学调查。运用PCR-RFLP方法分析XRCC1基因Arg194Trp位点的多态性。应用Logistic回归模型分析该位点多态性与肺癌易感性的关系。结果 等位基因Arg和Trp在病例组的频率分别为69.82%和30.18%，在对照组中则分别为74.30%和25.70%，两组间有显著差异(P=0.0386)。携带纯合突变基因型Trp/Trp者患肺癌的风险显著高于携带野生型Arg/Arg者，其OR值为1.72 (95%CI:1.05-2.80)。携带纯合型Trp/Trp的吸烟者患肺癌的风险约为携带野生型Arg/Arg的非吸烟者的7倍(OR=7.18,95%CI:3.09- 16.66)；是携带野生型的吸烟者的2倍(OR=2.02,95%CI:0.92-4.43)。结论 DNA修复基因XRCC1密码子194的多态性可能与肺癌的易感性有关，且在吸烟者中，Trp/Trp基因型可使肺癌发病风险显著提高，提示XRCC1可能通过遗传因素及遗传因素与环境致癌因素的交互作用影响肺癌的危险性。
  
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  苏州地区临床分离儿童肺炎链球菌耐药情况分析

  张涛;赵根明;陶云珍;陈蓉;诸丽娟;林玉尊;丁云芳 郝创利Δ

  . 2008, 35(3): 353-0.

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  目的 检测苏州地区2006年临床分离的儿童肺炎链球菌对常用抗生素的耐药情况。方法 从新入院患儿鼻咽部采集标本，经实验室分离，并采用奥普托欣和（或）去氧胆酸钠鉴定为肺炎链球菌后，采用纸片扩散法（Kirby-Bauer法）和E-test法对分离到的89株肺炎链球菌进行抗生素的敏感性试验。结果 89株肺炎链球菌中，青霉素不敏感菌株47株，为52.8%，红霉素、四环素、克林霉素、复方新诺明和氯霉素的耐药率分别为88.8%，78.7%，86.5%，55.1%和10.1%，多重耐药率为89.9%。对万古霉素，氧氟沙星100%敏感。结论 苏州地区儿童肺炎链球菌的耐药情况严峻，本研究结果对肺炎链球菌感染的治疗和抗菌药物的选择具有参考价值。
  
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  多聚物-1反应性 T细胞对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护机制

  李霞 钱韶红△ 孙兴怀

  . 2008, 35(3): 358-0.

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  目的 探讨多聚物-1（copolymer-1,Cop-1）反应性T细胞对高眼压大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）的保护机制。方法 大鼠后肢足垫注入0.2mgCop-1或磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution，PBS）后10d，取出腹股沟淋巴结，培养Cop-1反应性T细胞（TCop-1）或PBS对照组T细胞（TPBS），用逆转录聚合酶链反应测定gamma干扰素（interferon –gamma，γ-IFN）和IL-4 mRNA的表达水平，从而分析培养的T细胞亚型；39只高眼压大鼠随机分为2组，1组（n=19）腹膜内注射TCop-1，另1组 (n=20)注入TPBS作为对照，21d后观察RGCs的存活情况；用ELISA法测定T细胞上清液中脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）的分泌量。结果 免疫后21d，Cop-1组RGCs存活数目较PBS组多（t=8.0204,P<0.01）,TCop-1组gamma干扰素（interferon –gamma，γ-IFN）mRNA表达水平较PBS组高，而IL-4在两组间的表达差别无统计学意义。TCop-1在Cop-1刺激后脑源性神经营养因子分泌量为（3385.42±836.33）pg/mL，单纯TCop-1分泌量为（1026.24±135.10）pg/mL，而TPBS分泌量为（19.87±71.20）pg/mL。前者分泌量远大于后两者（F=175.66,P<0.01,P<0.01,单因素方差分析，Bonferroi）。结论 Cop-1反应性Th1细胞是发挥视神经保护作用的重要细胞，保护机制之一可能通过TCop-1在局部分泌BDNF来实现。
  
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  星点设计-效应面法优化柘树提取物片剂处方

  吴海健 王建新Δ 黄建明 韩丽妹 侯爱君Δ

  . 2008, 35(3): 363-0.

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  目的 通过星点设计-效应面法优化柘树提取物片剂处方。方法 以微晶纤维素（MCC）的用量、乳糖的用量和黏合剂聚维酮（PVP）的浓度为考察因素，以崩解时间和3个有效成分的溶出度为考察指标，分别用多元线性模型、二次多项式模型描述考察指标和3个考察因素之间的数学关系，绘制效应面和等高线图，确定较优处方并进行验证试验。结果 根据二次多项式模型，发现3个考察因素和4个考察指标之间存在可信的定量关系；优选的最佳处方为MCC的用量40 mg，乳糖的用量为70 mg，PVP浓度为4 %，优化处方各设定的预测值和测定值非常接近。结论 采用星点设计-效应面法，得到了基于二次多项式模型的柘树提取物片剂处方优化模型，实现了该片剂的处方优化。
  
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  锁骨下喙突入路臂丛神经阻滞—单点定位法和两点定位法的比较

  车薛华 梁伟民△ 李佩盈

  . 2008, 35(3): 369-0.

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  目的 采用随机对照临床试验的方法对两点法和单点法这两种定位方法在锁骨下喙突入路臂丛阻滞中的效果进行比较。方法 57名拟于锁骨下臂丛神经阻滞下行前臂和手部手术的患者被随机分为单点组（Group Single, n=29）和两点组（Group Dual, n=28）, 采用神经刺激仪在锁骨下部定位臂丛神经，单点组定位臂丛后束，引发伸腕伸指动作后注入0.5%罗哌卡因30mL；两点组除定位后束外，追加定位臂丛外侧束肌皮神经组分，引发屈肘反应，分别注入0.5%的罗哌卡因20mL和10mL。阻滞后每隔10min评价臂丛神经所支配的所有上肢7支终末神经的感觉阻滞情况，同时记录总体评分，操作时间和副反应的发生率。结果 阻滞后10min，两点组的肌皮神经的阻滞率高于单点组，阻滞后30min,两点组中肌皮神经和前臂内侧皮神经的阻滞率高于单点组(89.3% vs 62.1% ； 85.7% vs 58.6%，P＜0.05)。两组的总体评分无差异(11.5±2.4 vs 10.8±4.3)。结论 对于锁骨下喙突入路神经阻滞，用神经刺激器引发2个运动反应后分次注入局麻药的方法优于单点法。
  
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  联合应用坦素罗辛与溴吡斯的明治疗宫颈癌术后尿潴留

  任爱民 杨 丹 韩立敏　 许 明 张秀珍 屠蕊沁&#0;

  . 2008, 35(3): 373-0.

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  目的　分析盐酸坦素罗辛联合溴吡斯的明防治宫颈癌行广泛性子宫切除术后尿潴留的疗效。方法　自1999年3月至2007年4月在复旦大学附属中山医院因宫颈癌行广泛性子宫切除术的患者57例，治疗组28例，为拔导尿管前后口服盐酸坦素罗辛和溴吡斯的明的患者；对照组29例，为单纯导尿的患者。两组手术范围、术中出血、年龄等情况大致相当。比较两组尿潴留发生情况及药物毒副反应。结果　在经术后常规导尿1周或2周，治疗组和对照组发生尿潴留者分别为3例（10.7％）与17例（58.6％），尿潴留发生率前者显著低于后者（Ｐ< 0.01）。首次拔管后治疗组平均膀胱残余尿量为44.4&#61617;60.9mL，对照组为167.8&#61617;159.9mL，前者显著低于后者（Ｐ< 0.01）。分层数据显示，无论术后1周还是2周拔除导尿管，治疗组的膀胱残余尿均显著少于对照组（Ｐ< 0.05）。治疗组未观察到明显的毒副作用。结论　盐酸坦素罗辛联合溴吡斯的明对防治宫颈癌广泛性子宫切除术后的尿潴留有较好的作用，可在临床推广应用。
  
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  中山医院非内分泌科住院患者糖代谢紊乱情况调查

  凌雁 阴忆青 高鑫 Δ

  . 2008, 35(3): 376-0.

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  目的 调查2006年1月1日至12月31日复旦大学附属中山医院非内分泌科出院的成年住院患者糖代谢异常的分布和糖代谢的检测现状。方法 以空腹血糖（FBG）或餐后2小时血糖（2hPBG）或糖化血红蛋白（HbA1c）为检索参数，通过HIS系统提取2006年非内分泌科出院的所有成年住院患者（≥18岁）的相关信息，包括姓名，性别，年龄，住院号，病区，出院诊断，FBG，2hPBG，HbA1c等。根据出院诊断将研究对象定义为糖尿病患者和非糖尿病患者。组间计数资料比较采用X2检验。结果非内分泌科住院患者FBG，2hPBG和HbA1c的检测率分别为83.5%，3.3%和5.0%；在非糖尿病患者中，联合检测FBG和2hPBG，糖代谢异常检出率为45.7%，其中糖尿病和糖调节受损(IGR)检出率分别为16.5%和29.2%；其中>60岁组的糖代谢异常者占55.3%，明显高于≤60岁组的37.7%（ =27.7，P<0.05）。结论 大型综合医院住院患者是糖尿病的高危人群，建议常规对这些患者同时进行FBG和2hPBG的检测。
  
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  超临界流体制备BSA包衣微丸及释药特性

  肖菊香 马晓文 莫炜 宋后燕&#0;

  . 2008, 35(3): 380-0.

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  目的 采用自行设计的CO2超临界流体（supercritical carbon dioxide, ScCO2）包衣设备研究肠溶包衣参数，为开发蛋白质及多肽的口服制剂提供工艺基础。 方法 以载牛血清白蛋白 (bovine serum albumin, BSA)颗粒为微丸核心，以EUDRAGIT L100-55作为pH敏感的肠溶包衣材料，采用正交表研究压力、温度、增塑剂和包衣持续时间等不同的工艺参数组合，并考察肠溶包衣微丸的形态学和体外释放特性，以选择最优的二氧化碳超临界流体包衣工艺。 结果 压力为20Mpa、温度为35℃、使用40%增塑剂的条件下包衣30min，所得BSA微丸在模拟胃液中释放量小于5％，在模拟肠液中迅速释放，符合肠溶包衣的要求。结论 得到了通过ScCO2制备肠溶微丸的最优参数组合，为二氧化碳超临界流体包衣的进一步研究提供了基础。
  
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  窒息对大鼠肝细胞超微结构和元素分布的影响

  朱会耕△ 叶若兰 方勇

  . 2008, 35(3): 384-0.

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  目的　通过研究窒息动物肝细胞超微结构及其元素含量的变化，探讨窒息引起肝脏损害的发病机制，为临床抢救窒息患者时对保肝措施予以关注提供科学依据。方法　SD大鼠经腹腔麻醉后，经气管插管由人工呼吸机维持通气，窒息组在关闭人工呼吸机使呼吸停止3、6、9、12、15min 后取肝脏。窒息-复氧组在呼吸停止后3、6、9、12、15min重新开启呼吸机120min，再取肝脏。样本经处理后进行透射电镜观察和元素显微分析。结果　大鼠窒息3min时肝细胞已出现滑面内质网囊管扩张和线粒体基质变深。窒息6min时线粒体肿胀、粗面内质网脱颗粒。窒息12min时线粒体破坏，核异染色质聚集成团块状。窒息15min时可以出现部分肝细胞坏死。经过120min复氧，除6min组线粒体肿胀程度减轻以外，其余各组均未见改善。窒息后，肝细胞及其线粒体Na、K元素含量明显降低，而Cl、Ca元素含量则显著升高；窒息后经过120min复氧，除Ca含量有所恢复外，Na、K、Cl的变化没有改善。结论　肝脏在窒息早期即发生细胞结构损伤，窒息后虽然经过及时复氧，但细胞结构损伤改善有限，窒息引起肝细胞Na、Cl、K、Ca浓度的持续变化可能是造成肝脏损伤的原因之一。
  
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  别嘌呤醇对未成熟大鼠脑白质损伤时自由基变化的影响

  胡 勇△ 邵肖梅 张旭东

  . 2008, 35(3): 389-0.

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  目的 通过制作早产儿脑白质损伤动物模型，探讨自由基在早产儿脑白质损伤发病机制中的作用及别嘌呤醇的保护作用。 方法 利用新生1日龄SD大鼠32只行双侧颈总动脉结扎（BCAO）制作脑白质损伤模型，随机分为假手术组（Sham, n=8）、BCAO组(BCAO, n=12)及别嘌呤醇干预组（ALLO, n=12）。BCAO后48h检测脑白质XO、iNOS、Na+K+－ATP酶、谷胱甘肽转移酶（GST）及&#8226;OH活力、UA及MDA含量。结果 MDA含量(nmol/mgprot)：BCAO组(2.56±0.78)较Sham组(1.36±0.23)明显升高（P<0.01），而ALLO组(1.59±0.19)较BCAO组明显降低（P<0.01）。UA含量(mg/gprot)：BCAO组(13.57±0.72)及ALLO组(12.34±0.21)均较Sham组(11.42±0.56)明显升高（P<0.01），而ALLO组较BCAO组明显降低（P<0.01）；&#8226;OH活力（U／mgprot）：与Sham组（156.0±8.07）比较, BCAO组（206.6±21.27）明显升高(P<0.01) ,而ALLO组（191.7±13.04）较BCAO组显著降低（P<0.05）。；XO及iNOS活力：BCAO组较Sham组明显升高（P<0.01），而ALLO组较BCAO组明显降低（P<0.05）；Na+-K+－ATP酶活力（μmolpi/mgprot/h）：与Sham组（3.04±0.26）比较, BCAO组（2.30±0.37）及ALLO组（2.11±0.26）均明显降低(P<0.01),而ALLO组与BCAO组相比差异无显著性（P＞0.05）；GST活力（U／mgprot）：与Sham组（56.75±4.22）比较, BCAO组（37.60±8.32）明显降低(P<0.01)，而ALLO组（43.39±4.44）比BCAO组显著提高（P<0.05）。结论 自由基在早产儿脑白质损伤中可能发挥了核心作用。别嘌呤醇对缺血引起的早产大鼠脑白质损伤具有一定的保护作用。
  
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  通过耐受前体或结构类似物筛选提高辅酶Q10产量

  李继扬 丁妍 周珮Δ

  . 2008, 35(3): 393-0.

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  目的 提高热带假丝酵母生产辅酶Q10的能力。方法 将热带假丝酵母通过紫外诱变后耐受生物合成前体物质或结构类似物的实验，从抗性菌株中筛选获得辅酶Q10的高产菌株。结果 通过苯甲酸和对羟基苯甲酸的耐受试验，获得辅酶Q10产量比出发株分别提高84.11%和184%的高产菌株A和B，最高可达120μg/mL。结论 通过发酵产物前体结构类似物的耐受实验，可以提高产物的产量。
  
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  非糖尿病腹膜透析患者胰岛素抵抗及脂代谢紊乱相关分析

  张敏;朱彤莹△;李芸;田菁;孙怡;徐美珍;顾勇;林善锬

  . 2008, 35(3): 396-0.

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  目的 观测非糖尿病腹膜透析患者胰岛素抵抗和脂代谢紊乱发生情况及分析其相关影响因素。方法 入选非糖尿病透析龄大于3个月规律连续不卧床腹膜透析（CAPD）患者48人，在相同条件下测定其身高、体重、体重指数（BMI），空腹血糖、空腹胰岛素及血脂等生化指标，以生物素-亲和素酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）测定脂联素、瘦素、抵抗素等脂质因子。结果 非糖尿病腹透患者48人（男20，女28）稳态胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）为6.32±8.97，其中4位患者在透析过程中发展为糖尿病。根据IR中位数2.59分组，IR≥2.59组（n＝24）与﹤2.59组（n＝24）两组比较发现在BMI、三酰甘油、铁蛋白和脂联素、瘦素存在显著差异（P<0.05）。相关分析结果表明IR与铁蛋白（P<0.01）、血脂（胆固醇、三酰甘油）分别成正相关（P<0.05）。结论 非糖尿病腹透患
实验研究报道
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  人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测

  魏见伟 王德春 胡有谷△

  . 2008, 35(3): 401-0.

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  目的 构建人结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1, TIMP1)基因腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）表达质粒，并观察其在HEK293细胞中的表达，检测目的蛋白的生物学活性。方法 采用PCR技术，分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法，以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞，用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究，MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性，ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达，转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性，ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白。结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1，转染 HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白，为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。
  
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  肥大细胞类胰蛋白酶促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435的跨膜侵袭

  顾漪萍 向 萌 陆 超 赵凤娣 李晓波△ 殷莲华

  . 2008, 35(3): 407-0.

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  目的 研究类胰蛋白酶对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435侵袭力的影响及其机制。方法 通过体外细胞侵袭力试验观察不同浓度、不同时间类胰蛋白酶对乳腺癌MDA-MB-435细胞跨膜侵袭力的影响，并利用RT-PCR以及明胶酶谱法研究类胰蛋白酶对基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制物（tissue inhibitor of metalloproteinases-2，TIMP-2）表达水平的调节。结果 150～500pmol/L的类胰蛋白酶可以促进MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭；还可以促进MMP-2、TIMP-2的mRNA表达（P<0.01）和MMP-2的蛋白表达（P<0.05）。 结论 类胰蛋白酶可以促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭，该作用可能与增加MMP-2的mRNA和蛋白表达、TIMP-2的mRNA表达相关。
  
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  风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的初步研究

  邹俊 卢奕△ 褚仁远

  . 2008, 35(3): 411-0.

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  目的 观察风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法 利用相差显微镜、透射电子显微镜、免疫细胞化学技术观察风疹病毒R16株在人胚晶状体上皮细胞中的形态学及生长特性。结果 风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后，细胞不产生明显的病变效应。受病毒感染的人胚晶状体上皮细胞生长速度较慢，10d后可在细胞浆内观察到呈不规则球形、由单层脂质膜包绕、直径60～80nm的病毒颗粒，包括致密核心和无致密核心两种颗粒。而在胞核中未发现病毒颗粒。结论 风疹病毒R16株能在人胚晶状体上皮细胞中增殖，为进一步研究风疹病毒感染后先天性白内障的发生机制打下基础。
  
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  小鼠腹部心脏移植模型的显微外科技巧及并发症的预防

  彭润生 王春生△ 杨兆华

  . 2008, 35(3): 411-0.

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  目的 探讨小鼠腹部心脏移植术的手术技巧及并发症的预防和处理。 方法 雄性昆明（KM）小鼠60只，随机分供、受体2组，采用大鼠Ono术式进行小鼠腹部异位心脏移植，小鼠供体升主动脉与受体腹主动脉端侧吻合，供体肺动脉与受体下腔静脉吻合，实验30例。 结果 实验成功率86.7％(26/30)。取供心时间(9.4±1.2)min，供心修取时间(14.8±1.2)min，受体手术时间(60.4±2.4)min，其中吻合时间(29.8±2.5)min。结论 掌握小鼠心脏移植的显微外科技巧和正确的处理手术并发症，可以成功建立小鼠腹部心脏移植模型。
  
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  胚胎干细胞治疗博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的研究

  余慧 胡洋 李惠萍△ 褚建新 唐帆

  . 2008, 35(3): 418-0.

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  目的 研究静脉注射胚胎干细胞（ESC）对肺纤维化小鼠的治疗作用。方法 气管内滴注博来霉素8.5mg/kg制作C57/BL6雌性小鼠的肺纤维化模型。治疗组(n=20)静脉注射S8小鼠ESC，对照组(n=10)注射生理盐水。治疗组又分为单次治疗(n=10)和重复治疗(n=10)，两者均在造模后1h静脉注射ESC，重复治疗组在造模后3d再次静脉注射ESC。记录小鼠的生存时间，测定小鼠肺组织的羟脯氨酸含量，肺脏病理学观察炎症状态。利用秩和检验统计3组小鼠生存时间，方差分析3组小鼠肺羟脯氨酸含量的差异。结果 接受干细胞治疗后，肺纤维化模型小鼠的生存时间(d)延长，重复治疗组更加明显（对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为7.8±2.8、8.4±3.8、13.5±5.6，P<0.01）；肺羟脯氨酸含量(μg/mL)降低 [对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为（8.59±1.14）、（8.23±1.09）、（5.51±0.39），P<0.01）]；肺脏病理检查显示肺组织炎症程度降低，结构破坏减轻。结论 静脉注射胚胎干细胞可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和肺纤维化，延长肺纤维化小鼠的生存时间。
  
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  HPLC法测定壳聚糖-聚天冬氨酸-5-Fu纳米粒子在小鼠肝脏中的浓度

  张丹瑛 朱新宇 董玲△ 王吉耀 沈锡中 郑永丽

  . 2008, 35(3): 423-0.

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  目的 建立测定小鼠肝脏药物浓度的HPLC法, 比较凝胶化法制备的壳聚糖-聚天冬氨酸-5氟尿嘧啶(CTS-Pasp-5-Fu)纳米粒与5-氟尿嘧啶原药在小鼠肝脏中药物浓度。方法 雄性健康昆明小鼠（KW）分为2组，分别灌胃给予5-FU原药及其CTS-Pasp纳米粒，灌胃后0.25、1、2、4、6、8、12、16、24和48h10个时间点取小鼠肝脏，匀浆液用乙酸乙脂提取，氮气挥干，残渣用甲醇溶解后进样，HPLC法测定2组给药组肝脏内药物浓度。结果5-Fu原药组在肝脏中的药物峰浓度出现在灌胃后2h左右。此后肝脏药物浓度逐渐降低,CTS-Pasp-5Fu纳米粒组经小鼠灌胃后,肝脏药物浓度呈现出三峰型,在0.25h即达到一个药物峰浓度,此后峰浓度分别出现在4h和16h左右,16h时候达到最高峰,此后逐渐下降, CS-Pasp-5FU纳米粒的肝脏中药物峰浓度（Cmax）降低，肝脏中药物浓度时间曲线下面积（AUC）明显增加。结论 CS-Pasp-5FU纳米粒能延缓5-Fu在肝脏内的分布。
  
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  血管内皮生长因子与早期糖尿病大鼠视网膜屏障破坏的相关性

  马晓萍 袁非△

  . 2008, 35(3): 427-0.

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  目的 探讨VEGF是否与早期糖尿病大鼠视网膜屏障的破坏有相关性，并定位其破坏位置。方法　雄性Wister大鼠144只，随机分为实验性糖尿病组和正常对照组（各72只）。用RT-PCR技术定量第3、7、10、14天时两组大鼠视网膜中VEGFmRNA的表达水平。同时使用红色荧光微球来空间定位早期糖尿病大鼠视网膜屏障的破坏情况。结果　实验性糖尿病大鼠视网膜VEGF mRNA表达水平随时间呈现升高趋势。其视网膜屏障的破坏位于浅层视网膜的静脉及毛细血管。结论　早期糖尿病大鼠视网膜屏障的破坏与VEGFmRNA水平的升高相一致，其破坏位置在浅层视网膜的静脉及毛细血管。
  
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  自体骨髓单个核细胞植入对心肌梗死后心脏功能的影响

  孙勇新 赵强△ 潘翠珍 夏利民 徐德民 陈安清 王哲

  . 2008, 35(3): 431-0.

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  目的 探讨骨髓单个核细胞植入对心肌梗死后心脏功能的影响。 方法 以冷冻损伤的方法建立新西兰种家兔心肌梗死模型，分为骨髓单个核细胞组（mononuclear bone marrow cells，MN-BMCs组）和对照组，各8只。4周后， MN-BMCs组中将提取分离的MN-BMCs，植入心肌梗死及其边缘区，对照组于心肌梗死及其边缘区注射相应体积的IMDM完全培养液。以超声心动图分析细胞植入前后心脏功能改善情况。 结果 MN-BMCs植入心肌梗死及其边缘区可以改善局部及整体心脏功能：细胞移植4周后两组之间比较，MN-BMCs组局部心脏功能明显优于对照组，表现为MN-BMCs组比对照组心肌梗死区室壁厚度增加，（4.81±0.55）mm vs 3.94±0.54）mm，P＜0.05；收缩期和舒张期心肌梗死区室壁运动速度明显增加，分别为（8.20±0.77）cm/s vs 7.00±0.56）cm/s，P＜0.05，（8.51±0.93） cm/s vs （6.75 ±0.57）cm/s，P＜0.05。细胞移植4周后，MN-BMCs组整体心脏功能亦优于对照组，表现为MN-BMCs组比对照组心腔减小，LVDD分别为 （14.89±1.36）mm vs （16.24±1.31）mm，P＜0.05，LVSD分别为（10.48±1.32）mm vs （12.29±1.48）mm，P＜0.05；MN-BMCs组左心室收缩功能明显改善，左室射血分数及缩短分数提高，LVEF分别为（65.25±5.73）% vs （57.00±5.81）%，P＜0.05，LVFS分别为 （30.25±3.73）% vs （24.88±3.95）%，P＜0.05。 结论 骨髓单个核细胞植入心肌梗死及其边缘区可以改善心肌梗死后心脏功能。
  
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  转染Smad 7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

  于 鸿 陈 琦 刘 晔 赵仲华 郭慕依△

  . 2008, 35(3): 436-0.

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  [摘要] 目的 探讨Smad 7基因对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、Col Ⅲ）表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定；又分别采用RT-PCR和Western blot法，检测转染阳性MsC克隆ColⅠ、Col Ⅲ表达改变。结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆（S-22与S-26），并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制, 其中S-22克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA表达分别降低47 %和56 ％，其蛋白表达分别降低65 %和54 ％。结论 Smad 7可能通过抑制组织内ColⅠ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。
  
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  连花清瘟胶囊对慢性阻塞性肺病治疗作用的研究

  夏敬文 陈小东△ 张静 周仲文

  . 2008, 35(3): 441-0.

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  目的 研究连花清瘟胶囊对慢性阻塞性肺病（Chronic Obstructive Pulmonary disease，COPD）大鼠模型气道炎症的影响。方法 香烟熏吸法复制COPD大鼠模型。采用随机平行对照的实验方法,将30只清洁级Wistar大鼠随机分为对照组、COPD模型组和连花清瘟胶囊治疗组,每组各10只。肺组织切片行苏木精-伊红染色，测定各组大鼠血清、肺组织匀浆及支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中白介素8 (IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果 模型组大鼠血清、肺组织匀浆及BALF中IL-8和TNF-α含量较对照组明显升高(P < 0.01)。与模型组相比较, 连花清瘟胶囊治疗组血清、肺组织及BALF中IL-8和TNF-α含量显著降低(P < 0.01)。结论 连花清瘟胶囊具有抑制COPD气道炎症的作用。
  
经验交流
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  腹膜后纤维化诊治上尿路梗阻11例报告

  徐煜 徐可 姜昊文 陈忠清 丁强Δ

  . 2008, 35(3): 445-0.

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  目的 总结腹膜后纤维化上尿路梗阻的诊治经验，为腹膜后纤维化诊治提供参考。方法 回顾性分析1994年1月至2007年9月间本院收治的11例腹膜后纤维化患者上尿路梗阻的诊治情况,男7例，女4例，均以肾积水为临床表现。1例行肾造瘘术，7例行输尿管松解术，2例行输尿管切断再吻合，1例因患侧肾脏无功能，行患肾切除。结果 随访12~36个月，3例失访，2例因脑梗死亡，余患者在随访期内病情稳定或无变化。结论 腹膜后纤维化上尿路梗阻是少见病因，病理是本病诊断的最终依据。早期的手术治疗能够保护患者的肾功能。
  
方法技术
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  人骨髓间充质干细胞的分离培养、多向分化与鉴定

  戴文达 方涛林 李熙雷 林红 董 健△&#;陈峥嵘

  . 2008, 35(3): 448-0.

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  目的 探索一个高效分离和扩增人骨髓间充质干细胞的方法，并通过形态学和多向分化能力进行鉴定。方法 抽取人胸椎骨髓标本，联合利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs，体外扩增后传代，相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR。在地塞米松、左旋VitC、b-磷酸甘油、FK506作用下向成骨细胞诱导分化；在TGF-beta 3、重组人胰岛素、丙酮酸钠、亚硒酸等作用下向软骨细胞诱导分化；在地塞米松、IBMX、吲哚美辛的作用下向脂肪细胞诱导分化；在VEGF、bFGF作用下向血管内皮细胞分化。结果 原代和传代细胞呈梭形外观，生长增殖能力良好。细胞表面标记物CD13、CD29，HLA-2阳性，CD34、CD45 和HLA-DR阴性。经定向诱导分化后，细胞分别呈现成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞的表型特征。结论 该方法能从人骨髓中高效分离和扩增MSCs，能成功定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞。
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  不同基因载体系统对脐带血间充质干细胞转染效果的初步研究

  马晓生 吕飞舟Δ姜建元 李小康

  . 2008, 35(3): 453-0.

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  目的 比较慢病毒载体和腺病毒载体转染人脐带血间充质干细胞后，外源基因的表达。方法采用人脐带血分离培养间充质干细胞，制备表达GFP的慢病毒载体和腺病毒载体，用以转染间充质干细胞，观察其外源基因的表达。结果 脐带血间充质干细胞与骨髓中的类似，其外表呈纤维样；转染5周后，慢病毒载体转染的GFP阳性表达明显高于腺病毒载体。结论 慢病毒载体较腺病毒载体作为基因转导系统更有优势。
  
综述
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  Hedgehog-Gli信号传导通路在脑肿瘤中的研究进展

  王 柯 车晓明△

  . 2008, 35(3): 457-0.

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  脑肿瘤，特别是恶性脑肿瘤的治疗目前仍是临床医生面临的一个难题，重要的原因之一是由于对脑肿瘤的发生发展机制尚不明了。最新研究表明：神经干细胞、脑肿瘤干细胞都可能参与这一过程，针对干细胞水平的研究将给脑肿瘤的治疗带来新希望。Hedgehog-Gli信号通路正是一条影响干细胞生物学行为的重要通路。本文就该通路在神经系统发育、神经干细胞分化和脑肿瘤发生的研究作一综述。
  
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  氯普鲁卡因鞘内给药神经毒性的研究进展

  解轶 黄绍强 &#0;梁伟民

  . 2008, 35(3): 461-0.

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  氯普鲁卡因（Chloroprocaine, CP）经动物和临床证实，是一种起效快、效果确切、没有快速耐药、毒副反应小的短效局麻药。最近国外已经证实去除防腐剂（亚硫酸盐）和稳定剂后的纯盐酸CP可安全用于硬膜外麻醉，重新燃起了业界将CP用于脊麻的兴趣。本文总结了近几年关于CP脊麻临床特点的观察，针对目前使用中存在的争议，探讨其神经毒性的相关因素及发生机制，为进一步研究CP鞘内给药安全性提供有效手段和可靠途径。
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  重新认识产科麻醉中升压药的选用

  黄绍强&#;&#0;综述

  . 2008, 35(3): 464-0.

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  摘要&#61533; 早期的动物实验表明麻黄碱相对&#61537;肾上腺素受体激动剂而言极少引起子宫胎盘血流减少，因此一直是产科麻醉首选的升压药，然而近年来的研究提示，对苯肾上腺素等&#61537;受体激动剂引起子宫胎盘血管收缩的顾虑被夸大了。麻黄碱可引起产妇心动过速，并且由于代谢兴奋作用能引起胎儿血pH和碱剩余降低，而苯肾上腺素处理脊麻后低血压更加有效且容易滴定，没有发现引起胎儿酸血症的报道。尽管在这一领域还需要进一步的研究，但目前的证据似乎提示苯肾上腺素才是更符合产科需要的升压药。
  
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  宫颈妊娠的血管性介入治疗

  赵文荣（综述） 杨 丹△（审校）

  . 2008, 35(3): 468-0.

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  宫颈妊娠是一种严重的异位妊娠，可以导致阴道大出血甚至危及生命，这也是其治疗中的一个难点。血管性介入治疗：子宫动脉栓塞术能够安全有效地控制阴道出血，单独应用或联合其他治疗取得良好的效果，正逐渐被采用。
短篇报道
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  AIH-PBC重叠综合征：6例报告及文献复习

  涂传涛 朱新宇 张顺财 胡锡琪 王吉耀

  . 2008, 35(3): 471-0.

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  青少年型肾消耗病１例报道

  陈　越　钟一红　丁小强△ 　蒋素华　徐少伟

  . 2008, 35(3): 474-0.

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  2例心脏直视术后缩窄性心包炎的治疗和外科诊断

  宋凯 杨兆华 王春生Δ

  . 2008, 35(3): 475-0.

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