2008年, 第35卷, 第4期　刊出日期：2008-07-20

  

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论著
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  小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体外对树突状细胞的作用

  顾晓冬 洪军 项建斌 陈宗祐

  . 2008, 35(4): 477-0.

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  目的 构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体，并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突状细胞（dendritic cell，DC）的作用。方法 针对已经筛选确定的CD80基因RNA干扰有效靶序列，合成靶序列的双链DNA，接入pGCL-GFP载体，再与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞，包装产生慢病毒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度；同法构建出CD86基因RNA干扰慢病毒载体。慢病毒感染体外培养的DC，通过荧光显微镜检测感染效率，Annexin V/PI双染色法检测感染细胞凋亡和坏死情况，流式细胞仪检测CD80和CD86的表达情况。结果 PCR和测序证实，pGCL-CD80shRNA和pGCL-CD86shRNA慢病毒载体构建正确，病毒滴度均达2×107TU/mL，适合感染DC的MOI值为20，此时慢病毒对DC具有低毒性，感染效率为85.42%。CD80和CD86表达的抑制率分别为82.05% 和77.78%。结论 成功构建出小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体，其有明显抑制DC表面CD80和CD86的表达，这为移植物排斥提供了新的治疗手段。
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  大鼠肺移植供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化

  丁建勇 葛棣 谭黎杰 郑如恒 王群

  . 2008, 35(4): 489-0.

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  目的 通过对供肺保存过程中细胞凋亡和细胞坏死的动态变化的研究，探讨建立一种可以准确评估供肺保存质量的实验模型 方法 清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠42只，体重250～300g，预先分为7组，每组6只。整体获取心肺，置于4℃的新鲜制备的低钾右旋糖苷液（LPD）溶液中保存。保存不同的时间（0、2、4、6、12、18、24h）后，通过主肺动脉向肺内灌注20mL的500mmol/L锥虫蓝、20mL生理盐水和10mL4％的多聚甲醛后固定，蜡块包埋后按4mm层厚切片。在光学显微镜下观察锥虫蓝染色情况；另一方面作TUNEL染色和Hoechst染色，在荧光显微镜下观察，严格按照盲法原则由两位研究者对死亡细胞进行分类计数。 结果 随着供肺低温保存时间的延长，细胞死亡数量上逐渐增加，而且细胞的死亡类型上发生动态变化。在低温保存的条件下，4h组才开始有少量的坏死细胞出现，随着保存时间的逐渐延长，细胞坏死也逐渐增加，在供肺保存18小时以上组，坏死细胞显著增加；而细胞的凋亡开始于供肺保存2h组，在供肺保存12h组达到高峰，约占所有细胞的9％，在供肺保存18h组基本消失。 结论 通过对不同保存时间的供肺进行锥虫蓝、TUNEL、Hoechst三染色的方法，能很好的显示供肺保存后的细胞凋亡和坏死的情况。
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  MSCT肝动脉造影在肝移植受体术前评估中的应用

  丁莺 严福华 徐鹏举 陈刚 缪熙音 陆海峰 曾良斌

  . 2008, 35(4): 494-0.

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  【摘要】 目的 评估MSCT肝动脉造影诊断肝动脉解剖和变异情况在肝移植受体术前血管评价中的应用价值。方法 选取自2006年7月至2007年1月共75例预行肝移植的晚期肝病患者，均行肝脏动脉期扫描、肝动脉重建。由两位放射科医师对图像进行评估，包括肝动脉解剖和变异类型情况并与手术结果对照，统计分析诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果 75例中接受肝移植手术者共53例，MSCT检查发现肝动脉变异II~X型共15例，与手术结果对照，诊断的灵敏度：92.5％，特异度：100％，假阴性率：7.5％，假阳性率:0％。结论 MSCT是一种快捷、简便、无创、价廉的检查手段，可有效评估肝移植受体术前的肝动脉解剖和变异情况。

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  耐药逆转剂对人乳腺癌细胞P-糖蛋白、EMMPRIN和MMP表达的影响

  李海霞 唐峰 王文娟 李清泉 包芸 陈琦 许祖德;△

  . 2008, 35(4): 498-0.

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  目的 观察耐药逆转剂川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人乳腺癌MCF7/Adr细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶诱导物(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对MCF7/Adr细胞的毒性作用；荧光分光光度法测定细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)的荧光强度；Realtime RT-PCR和Western blot检测细胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9 mRNA和蛋白水平的变化。结果 TMP与ADM联合作用于细胞，与单用ADM相比，ADM对细胞的杀伤效应及细胞内ADM的荧光强度明显升高(P＜0.05)，且有浓度依赖性；与对照组相比，ADM能上调细胞P-gp、EMMPRIN和MMP2、MMP9蛋白表达；TMP能抑制ADM对细胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上调作用。结论 TMP在有效逆转肿瘤多药耐药的同时，还能抑制ADM对P-糖蛋白、EMMPRIN、MMP2和MMP9的上调。
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  Snail在17β雌二醇所引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

  丁景新 丰有吉△ 殷莲华 金鸿雁 尧良清 刘晓霞

  . 2008, 35(4): 504-0.

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  目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT），在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用。本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达，观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控。方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail，瞬时转染抑制Snail表达。10-8mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞，用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化，RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后，可使ES-2细胞胞质突起变短，细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低；针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节，并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用。 结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用，可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点。
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  人体坐骨神经连续组织切片三维重建研究

  陈增淦 △ 张猛 张健 陈统一 夏庆 谢水生 胡平 李华

  . 2008, 35(4): 510-0.

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  目的 探索一种人体坐骨神经连续组织切片计算机三维重建的实用方法。方法 新鲜人体坐骨神经标本1例，采用人发作为定位材料，连续冰冻切片后进行乙酰胆碱酯酶染色。切片经高分辨率扫描仪扫描后获取神经断面的数码信息，最后输入计算机进行三维重建。结果 三维重建真实地再现坐骨神经内部各神经束的三维立体结构，并可显示坐骨神经中神经束的任意断面及其全长的解剖结构与相互关系，形象地展示坐骨神经内部神经束的复杂重组过程。重建结构均能单独或搭配显示，还能以任意角度显示。结论 采用人发作为定位材料，同时借助计算机软件辅助定位的方法，人体坐骨神经内部神经束三维结构的重建取得较好的效果，因而是一种较为实用的周围神经内部神经束三维重建的方法。
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  兔股动脉粥样硬化斑块模型中TF及TFPI的变化规律

  黄成磊 罗心平△ 李剑 梁旺 施海明 马端△

  . 2008, 35(4): 514-0.

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  目的 观察兔股动脉粥样硬化斑块发展过程中斑块内组织因子（TF）及组织因子途经抑制物-1（TFPI-1）、组织因子途经抑制物-2（TFPI-2）的变化规律。方法 新西兰雄兔通过高脂饲养合并股动脉球囊损伤建立动脉粥样硬化斑块模型。在建模8周、10周和12周，分别截取球囊损伤处股动脉标本，采用免疫组化半定量图像分析技术检测斑块组织内TF,TFPI-1和TFPI-2的蛋白表达；荧光定量PCR测定斑块内TF,TFPI-1和TFPI-2的mRNA水平。结果 自8周、10周到12周，血管斑块中TF,TFPI-1和TFPI-2的观测区域内阳性染色面积均逐渐增加。自8周、10周到12周，血管斑块中TF的mRNA水平和TFPI-1的mRNA水平均逐渐增加；TFPI-2mRNA表现为前期无明显变化，12周时显著下调（P<0.001）。结论 在兔股动脉粥样硬化斑块的形成过程中，随着斑块内TF基因及蛋白表达的增加,TFPI-1和TFPI-2反应性表达增加，但其表达水平未能完全抑制斑块的进展。
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  HER4基因抑制对食管癌细胞Eca-109迁移和侵袭能力的影响

  逄旭光 范虹 葛棣△

  . 2008, 35(4): 521-0.

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  目的 探讨HER4在食管癌细胞侵袭和转移过程中的作用。方法 应用RNA干扰技术抑制HER4在食管癌细胞系Eca-109中的表达，Western blot 方法观察细胞MMP-9、VEGF蛋白表达水平的变化，细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察细胞迁移、侵袭能力的变化。结果 酶切鉴定和DNA测序分析显示HER4靶向RNA干扰重组载体构建成功；荧光实时定量PCR和Western Blot检测筛选得到最佳干扰效果质粒；该质粒转染细胞后，MMP-9、VEGF蛋白表达水平出现明显降低，细胞迁移、侵袭能力显著下降。结论 HER4与食管癌的侵袭转移潜能相关，敲减HER4的表达可明显抑制食管癌细胞系Eca-109的运动和侵袭能力。
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  原发性肝癌发病年龄的遗传方差分量模型研究

  郜艳晖 姜庆五Δ 丁保国 张丕德 陈思东

  . 2008, 35(4): 528-0.

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  目的 HBV感染对原发性肝癌的家庭聚集性有很重要的影响，本研究控制HBV感染的同时，研究原发性肝癌发病年龄的遗传方差分量。方法 家系资料来自2001-2002年江苏泰兴的一次原发性肝癌的病例对照家系调查，利用Cox遗传方差分量模型，分析满足方差分量模型要求的178个肝癌核心家系和184个肝癌扩展家系资料，MCMC方法用于协变量回归系数和随机效应方差分量的估计。结果 不包含家庭共享环境方差的简化模型最终收敛。核心家系和扩展家系资料的遗传方差分量模型得到相似的参数估计结果，扩展家系结果显示HBsAg阳性对肝癌发病年龄的HR值为12.13（95％CI: 6.94-23.03）；遗传加性效应方差分量为0.076（95％CI: 0.002-0.291），遗传显性效应方差分量为0.301（95％CI: 0.010-1.067）。结论 除HBV感染的作用外，原发性肝癌发病年龄的家庭相关还有遗传因素的作用，包括遗传加性效应和遗传显性效应/同胞共享环境因素影响肝癌的发病年龄。
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  乙型肝炎病毒X基因变异和慢性乙型肝炎患者临床与组织病理学指标的相关性

  包芸 朱虹光 张慧萍 凌玉琴 胡锡琪 朱荣Δ

  . 2008, 35(4): 533-0.

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  目的 探讨慢性乙型肝炎患者肝组织内乙型肝炎病毒（HBV）X基因部分区段的变异与HBV相关各临床与组织病理学指标的关系。方法 以83例慢性乙型肝炎肝穿刺活检标本作为研究对象，20例HBV相关性肝细胞癌作为对照；HBV X基因变异的研究采用PCR扩增和直接双向测序。免疫组化二步法显示肝组织内四种病毒蛋白的表达；荧光实时定量PCR检测肝组织内HBV DNA含量。结果 HBV X基因nt1583～1793区段错义突变主要出现在对应的X蛋白aa87（nt1632、1633）、88（nt1635、1636）、116（nt1719）、118（nt1726、1727）、119（nt1730）、127（nt1752）、130（nt1762）和131（nt1764）位氨基酸。nt1725～1730（aa118/119）突变与肝组织内HBcAg显著低表达（P=0.006），和HBV DNA低拷贝数（P=0.004）明显相关，尤以ACTGAC（TD）型突变最为明显；相反，nt1762/1764（aa130/131）位点突变则伴肝组织内HBcAg显著高表达（P=0.005）和高水平的HBV DNA含量（P=0.006）。同时，肝癌组中nt1725～1730 野生型所占比率明显高于慢性肝炎（P<0.05），而nt1762/1764 突变型所占比率肝癌组与肝炎组相比显著增高（P<0.01）。结论 肝组织内，在nt1725～1730突变能显著降低HBcAg 的表达和HBV DNA水平，nt1762/1764突变则相反。肝组织内HBV的高负载可能与肝细胞癌的发生有关
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  异氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

  姜琳 王琛 覃琴 刘霞 朱江 谢红

  . 2008, 35(4): 539-0.

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  目的 研究异氟烷预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌梗死面积的影响，探讨其对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。 方法 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，所有大鼠都平衡30min、给予异氟烷30min（除对照外）、异氟烷排除15min、心肌缺血30min和再灌注2h。实验将48只雄性 Sprague Dawley 大鼠随机分为6组：CON组、DMSO组、PTN组、ISO组、PTN+ISO组和ISO+PTN组。CON组无任何预处理，单纯心肌缺血再灌注；DMSO组于平衡15min时腹腔注射二甲亚砜（DMSO）；PTN组于平衡15min时腹腔注射NF-кB特异性抑制剂小白菊内脂parthenolide（PTN）500μg/kg；ISO组吸入1.0MAC异氟烷（ISO）30min，15min药物排出；PTN+ISO组和ISO+PTN组分别于异氟烷预处理开始前、后15min腹腔注射PTN 500μg/kg。实验中监测血液动力学变化，实验结束用氯化三苯四唑（TPT）染色法测定心肌梗死面积。 结果 平衡期时，各组间心率（HR），平均动脉压（MAP）和心率－收缩压乘积（RPP）的差别均无统计学意义（P＞0.05）。ISO组、PTN+ISO组和ISO+PTN组在吸入异氟烷期间HR、MAP和RPP明显降低（P＜0.05）。再灌注1h和2h引起各组MAP和RPP明显降低（P＜0.05）。与CON组（52.48±6.04%）相比，ISO组的心肌梗死面积显著减少（36.82±4.99%），而PTN+ISO组（51.56±3.15%）和ISO+PTN组（51.06±1.05%）的心肌梗死面积明显高于ISO组（36.82±4.99%）（P＜0.05）。 结论 异氟烷预处理使大鼠心肌梗死面积减少，对心肌缺血再灌注损伤有一定的保护作用。PTN可阻断此作用，推测NF-кB可能介导了异氟烷预处理的心肌保护作用。
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  过表达α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ通过增强p38MAPK信号通路抑制UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

  王 琼 王 浩 胡敏 申宗侯 张 英△

  . 2008, 35(4): 543-0.

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  目的 初步探讨α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ（简称FUT7）在UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721(简称7721)细胞凋亡过程中的作用及机制。方法 用RT-PCR检测转染pcDNA3-FUT7质粒的7721细胞及转染空质粒pcDNA3的7721细胞中FUT7基因的转录水平；用流式细胞仪检测细胞表面FUT7产物SLex的表达水平；利用DAPI染核计算UVC照射后细胞的凋亡比率；用结晶紫染色法测定细胞的存活率；利用Western blot检测Caspase3的剪切情况及p38MAPK、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平。结果 过表达FUT7能抑制UVC照射诱导的7721细胞凋亡，同时还增强了细胞中p38MAPK信号通路的活性，而用p38MAPK的特异性抑制剂处理则可削弱FUT7的抗凋亡作用。结论 在UVC照射诱导的7721细胞凋亡过程中FUT7具有抗凋亡的作用，这种作用可能部分通过增强p38MAPK信号通路活性而实现。
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  高效液相色谱法测定中国健康志愿者血清中坎地沙坦及坎地沙坦西酯片的体内药动学

  周玲洁 戴维 顾丽华 王以俭黄仲义梁建英

  . 2008, 35(4): 552-0.

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  目的建立高效液相色谱-荧光检测法测定人血清中坎地沙坦的方法，考察坎地沙坦西酯片在中国健康志愿者体内的药动学参数。方法 以萘普生为内标，按内标法定量。血清样品经盐酸酸化后，加入甲基叔丁基醚萃取，离心分离，取上清液置于已加入1，3-丙二醇的离心管，吹干后用流动相溶解进样。色谱柱：YMC&#61650; ODS柱 （250 mm×4.6 mm，5 µm），柱温：30 ℃；流动相：10 mmol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH到3.0）∶乙腈=60∶40，流速：1.0 mL/min。荧光检测波长：&#61548;ex 270 nm，&#61548;em390 nm。用该方法测定20名健康志愿者口服坎地沙坦西酯片8mg后血清中的药物浓度，进行药动学分析。 结果 坎地沙坦和萘普生的保留时间分别为10.4 min和16.5 min；坎地沙坦的线性范围是1.01~202 µg/L；日内、日间RSD小于10.39%；方法回收率在94.05%~112.80%范围内。结论 此方法适合人体药动学的血样分析，结果准确可靠。
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  浙江省德清县农村社区成人HBsAg阳性率调查

  付朝伟;王学才;王法弟;宋建根;朱建福;卫国荣;陈跃;姜庆五 △

  . 2008, 35(4): 556-0.

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  目的 了解中国农村社区成人居民HBsAg阳性率情况。方法 采用流行病学现况研究设计，整群抽取浙江省德清县4个农村社区，面对面调查上述社区中所有15~64周岁的社区户籍居民并以ELISA检测HBsAg感染状态。在SPSS11.0中进行数据分析，对于年龄等连续变量，采用独立样本t检验；对于阳性率等分类变量进行卡方检验。结果 在4434名合格对象中，农村社区18～64岁成人居民粗的HBsAg阳性率为7.3%；按照2000年全国人口进行年龄性别标化，标化的HBsAg阳性率为8.0%（男性年龄标化率为8.8%，女性为7.2%）。不同性别人群的HBsAg阳性情况有所不同，男性的HBsAg阳性率明显高于女性（8.8% vs.6.2%），差别有统计学意义（χ2＝10.52，P＝0.001）。结论 浙江德清农村社区成人居民HBsAg阳性率仍然较高。
实验研究报道
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  大鼠肺缺血再灌注损伤后前炎症细胞因子IL-1βmRNA的表达分析

  陈乾坤 姜格宁 丁嘉安 谢博雄 陈晓峰

  . 2008, 35(4): 560-0.

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  [摘要] 目的 通过对大鼠移植肺灌洗后、冷缺血保存和再灌注期间前炎症细胞因子IL-1βmRNA的表达进行分析，探讨IL-1β在此过程中介导的移植肺炎性损伤机制。 方法 本研究大鼠分6组，包括：正常肺（未灌洗）对照组、仅肺灌洗处理组、肺灌洗后冷缺血保存6h、12h、24h各1组、冷缺血保存24h后左肺移植再灌注3h组。在相应各时间点采取肺组织，用荧光定量实时PCR法检测IL-1βmRNA的表达并进行髓过氧化物酶（MPO）活性测定。 结果 除冷缺血12h组和冷缺血24h组之间IL-1βmRNA表达相对量差别不显著外（P=0.167），其余各组之间IL-1β表达相对量差别均有显著统计学意义(P<0.05)。仅灌洗组、冷缺血组和24h冷缺血移植再灌注3h组的IL-1βmRNA表达相对量均高于正常对照组，且随处理时间的延长而表达增加。仅灌洗组、冷缺血组和24h冷缺血移植再灌注3h组的MPO活性均高于正常对照组，且随处理时间的延长而表达增加，P<0.05。各组肺组织中MPO活性和IL-1βmRNA相对表达量呈较强的正相关关系，相关系数r=0.869，P<0.01。结论 前炎症因子IL-1β在肺缺血再灌注损伤机制中发挥着重要炎性损伤作用，可以作为移植肺功能评价及预后的重要指标之一；IL-1β基因的表达在保存液灌洗后的冷缺血保存早期就开始出现，而不是在再灌注之后的事件。
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  α1,3 FucT-VII基因转染对人结肠癌LOVO细胞的作用

  李文桦 罗建民 张英 张文

  . 2008, 35(4): 569-0.

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  目的 观察α1,3 FucT-VII基因转染对人LOVO细胞的生物学行为的改变 方法 采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后LOVO细胞中α1,3 FucT-VII基因的表达，CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期，并通过体外迁移、侵袭实验检测转染前后LOVO细胞运动侵袭能力的变化。 结果 LOVO细胞微弱表达α1,3 FucT-VII，RT-PCR和Western blot方法验证转染后的LOVO/FucT-VII高表达α1,3 FucT-VII。转染后细胞生长增快，S期细胞增多而G1期细胞减少，细胞趋化性迁移和侵袭能力增强。结论 α1,3 FucT-VII基因能改变人结肠癌LOVO细胞的生物学行为，增强细胞趋化性迁移和侵袭等转移表型。
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  CITED2基因SGJ序列插入突变与先天性心脏病发病

  彭婷 李笑天 王丽

  . 2008, 35(4): 574-0.

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  目的 分析先天性心脏病 （congenital heart defects, CHD） 患者的CITED2基因编码链基因突变的情况。 方法 收集101例散发型CHD患者和104例正常健康新生儿血液进行DNA抽提、PCR扩增，应用变性高效液相色谱仪进行CITED2基因全部编码序列的突变检测，对有异常峰型的DNA进行直接测序，并与GeneBank进行比较。 结果 首次在动脉导管未闭的患者发现CITED2基因的一种新的插入突变，在CITED2基因编码链碱基483位起始处插入一个重复9肽（c483_484ins27），导致蛋白的丝氨酸－甘氨酸富含区（SGJ）插入9个氨基酸p.Ser161-Gly162ins9。对照组中未检测到此突变。在CITED2基因的EP300结合基序未发现突变。 结论 中国先心病患者中存在CITED2基因突变，新发现的CITED2基因的重复9肽插入突变c483_484ins27可能是导致动脉导管未闭发生的原因之一。
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  Robo4在实体肿瘤血管新生中的表达及其意义

  张 波 吴国豪 吴肇汉 秦新裕

  . 2008, 35(4): 585-0.

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  目的 了解引导神经发育的Robo4基因在实体肿瘤血管新生中的表达，证实Robo4是肿瘤血管新生特异性标志物（tumor endothelial marker, TEM）。方法 采用RT-PCR技术检测多种不同细胞中Robo4 mRNA的表达情况；采用原位杂交和免疫组化染色检测多种肿瘤组织及其对应正常组织的相邻组织切片中Robo4和CD31在微血管的表达情况。结果RT-PCR显示在包括肿瘤细胞和正常细胞的9种受检细胞株中，Robo4 mRNA特异性表达于血管内皮细胞HUVEC和HMVEC中；Robo4在各种正常组织的微血管中表达极其微弱，而在肿瘤组织的微血管上显著表达；CD31在正常和肿瘤组织的微血管上均显著表达。结论Robo4仅特异性表达于肿瘤血管新生的部位，是肿瘤血管新生标志物。
  
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  RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对细胞株粘蛋白合成、分泌的影响

  陈智鸿 高磊 祝蓉 白莉 白春学

  . 2008, 35(4): 590-0.

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  目的：观察瞬时及稳定转染的RNA干扰法对水通道蛋白5（AQP5）的抑制效果，并观察AQP5抑制后细胞株粘蛋白合成、分泌的变化。方法：用化学合成siRNA和质粒介导的shRNA分别转染SPC-A1细胞，并在转染后7d内的不同时点收集细胞，检测AQP5 mRNA和蛋白的变化。用G418筛选稳定转染细胞株，用Western blot法检测稳转株AQP5蛋白的抑制情况。用ELISA法检测AQP5抑制后各时点及稳定转染细胞株MUC5AC表达量的变化。结果： siAQP5及shAQP5转染24h对AQP5 mRNA的抑制率分别为65％、79％。对蛋白的抑制在转染后第7d最明显，分别为93%，98%。稳转株（5株）对AQP5蛋白的抑制率为45-64%。ELISA显示瞬转第5d，MUC5AC的合成和分泌分别增加 57.9% 、85.3%。在5株稳定转染细胞中 (shAQP5-G1,G2,G3,A1,A5) MUC5AC的合成和分泌分别增加 59-156% 及33-166% 。结论：化学合成及质粒介导的RNA干扰法均能有效抑制SPC-A1细胞AQP5的表达，后者较前者更经济，抑制效应更优。与瞬时转染比较，稳定转染可长时间抑制特定基因的表达。AQP5抑制后，细胞株粘蛋白的合成、分泌增高。
临床经验交流
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  乏血供肝脏肿瘤经肝动脉化疗栓塞后胆汁瘤形成（附11例报道）

  龚高全 王小林△ 王建华 颜志平 程洁敏 刘嵘 刘清欣 钱晟 陈颐 李国平

  . 2008, 35(4): 597-0.

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  目的 研究肝脏肿瘤经动脉化疗栓塞（TACE）后胆汁瘤形成的原因及处理方法。方法 11例肝脏肿瘤经动脉化疗栓塞后胆汁瘤形成的患者，记录患者胆汁瘤形成前有无黄疸及处理方法，胆汁瘤形成前TACE次数，碘油栓塞后沉积表现，胆汁瘤形成时间，穿刺引流及预后。 结果 胆管癌患者5例，肝癌4例，结肠癌肝转移2例。胆汁瘤形成前有黄疸者7例，7例曾有经皮穿肝胆道引流术(PTCD)及胆道支架植入史。TACE次数平均值为3次（1~5次），碘油沉积散在淤滞于肝动脉。胆汁瘤形成于末次TACE后2~4周，7例穿刺引流证实胆汁瘤与胆道相通。7例同时接受PTCD者胆汁瘤愈合，3例未接受PTCD者，胆汁瘤引流管无法拔除，另1例死于引流后1月肾功能衰竭。结论 胆汁瘤形成与TACE中碘油栓塞、淤滞有关。胆汁瘤引流非常重要，部分患者PTCD可降低胆道压力加速胆汁瘤愈合。
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  不同方药对多囊卵巢综合征高瘦素血症的影响

  贾丽娜 王兴娟△

  . 2008, 35(4): 601-0.

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  目的 观察不同方药对多囊卵巢综合征（patients with polycystic ovary syndrome,PCOS）患者血清瘦素（leptin）的影响。方法 选择PCOS患者共43例（PCOS组），其中肾阴虚证患者25例，采用滋阴降火方药治疗（滋肾阴组），脾气虚证患者18例，采用健脾益气方药治疗（补脾气组）；年龄相同健康女性20例（对照组）。各组分别检测体重指数（BMI）、腰臀比（WHR）、腰围（WC）及血清Leptin、睾酮（T）、胰岛素（INS）的浓度，比较PCOS组和对照组之间，以及PCOS各组治疗前后各项指标的差异。结果 治疗前PCOS组的BMI、WHR、WC，及血清Leptin、T、INS水平均明显高于对照组（P＜0.01）；去除BMI、WHR、WC的影响后仍有显著性差异；43例PCOS患者中有33例的血清Leptin升高，但在两种证型之间分布无显著性差异（P＞0.05）；治疗后PCOS组（滋肾阴组、补脾气组）BMI、WHR、WC无明显变化，而血清Leptin、T、INS水平较治疗前降低（P＜0.05－P＜0.01）；其中滋肾阴组的血清T、INS水平较治疗前降低（P＜0.05～P＜0.01）；补脾气组的血清INS水平较治疗前有显著降低（P＜0.01）。滋肾阴组、补脾气组的血清leptin较治疗前有下降趋势，但无统计意义（P＞0.05）；结论 血清Leptin水平异常增高是PCOS的发生发展中不可忽略因素，不同方药均有降调血清Leptin水平趋势，且能改善PCOS患者的高睾酮血症、高胰岛素血症状态，至于Leptin、T、INS因果问题，还有待进一步深入研究。
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  改良手助腹腔镜下脾切除术(附12例报道)

  吴海福△ 叶挺 盛卫忠 顾大镛

  . 2008, 35(4): 605-0.

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  目的 探讨改良手助腹腔镜下脾切除术的安全性、有效性、经济性和微创性。 方法 回顾分析了2006年5月至2007年12月完成的12例改良手助腹腔镜下脾切除术的手术时间，术中出血量及术后并发症等情况。结果 12例全部在改良手助腹腔镜下完成脾切除术，无中转开腹，平均脾脏切除时间为2.04小时，术中平均出血量为181.6mL，术后平均住院时间为6.75d，无手术直接导致的并发症及死亡发生。结论 改良手助腹腔镜下脾切除术是安全有效的新方法，适用于脾脏疾病的脾切除手术。
  
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  宫腔镜检查对老年妇女异常阴道流血病因分析

  汪 清 陈 敏 郑瑞莲 隋 龙△

  . 2008, 35(4): 609-0.

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  目的 探讨老年妇女宫腔镜手术的安全性和绝经后老年妇女（≥60岁）阴道流血的宫腔病因。 方法 以250例生育期妇女宫腔镜手术为对照，对250例老年妇女进行宫腔镜检查及病理诊断，以分析绝经后老年妇女阴道流血的宫腔病因。 结果 引起老年妇女阴道异常流血的宫腔病因为：子宫内膜息肉134例（53.60%）。子宫黏膜下肌瘤32例（12.80%），萎缩性子宫内膜炎43例（17.20%），子宫内膜癌14例（5.60%），子宫内膜不典型增生2例（0.80%），子宫内膜恶性中胚叶混合瘤1例（0.40%），子宫内膜复杂型增生过长2例（0.8%）。宫腔粘连8例（3.20%），环嵌顿，断裂14例（5.60%）。其中子宫内膜息肉、子宫内膜癌、及萎缩性子宫内膜炎发病率明显高于生育期妇女（P<0.01）；而子宫粘膜下肌瘤、宫腔粘连及功能性子宫出血病的发病率明显低于后者（P<0.05）。 结论 对于老年妇女可安全地进行宫腔镜检查；异常阴道流血病因可及时、准确诊断。
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  超声乳化人工晶体植入术后24小时内眼压变化

  周 赟 李秋华△

  . 2008, 35(4): 613-0.

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  目的 探讨超声乳化人工晶体植入术后24h内眼压变化及术中使用缩瞳剂对减少术后早期高眼压的影响。 方法 对43例（43眼）行超声乳化人工晶体植入术的老年性白内障患者术前和术后2、4、6、8、10、24、48h的眼压进行观察，比较术中使用缩瞳剂的患者和未使用缩瞳剂的患者术后各时间点的眼压变化情况。 结果 43眼术后2～10h的眼压较术前明显升高(P<0.01)，术后4～10h的平均眼压高于21mmHg；术后24h的平均眼压恢复至正常水平，但仍比术前高；术后48h的眼压与术前无统计学差异(P>0.05)。术中使用缩瞳剂和未使用缩瞳剂的患者术后各时间点的眼压无统计学差异(P>0.05)，但未使用缩瞳剂的患者中有5例(5/28，17.9%)术后出现30mmHg以上的高眼压，使用缩瞳剂的患者中无一例眼压高于30mmHg。 结论 超声乳化人工晶体植入术后早期眼压有不同程度的升高，个别患者眼压高于30mmHg。术中使用缩瞳剂不能完全预防术后眼压升高，但能减少出现30mmHg以上的过高眼压。
方法技术
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  人肝脏星状细胞的一种改良分离方法

  王满 郭津生&#0;涂传涛 王吉耀 Scott L. Friedman;

  . 2008, 35(4): 617-0.

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  2-甲氧基雌二醇合成方法的改进

  蒋皓 夏鹏

  . 2008, 35(4): 621-0.

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  目的 合成新生血管抑制剂2-甲氧基雌二醇。 方法 以雌二醇为原料经过双乙酰化，四氯化锆催化下发生2-位乙酰基重排，溴苄保护3-位羟基，Baeyer-Villiger氧重排反应后产物再经过碱水解，2-位甲醚化，最后用盐酸脱去3-位苄基共6步合成2-甲氧基雌二醇。 结果 将文献报道路线缩短了一步，与原文献相比将改进的六步反应总收率提高了10%。合成获得的2-甲氧基雌二醇成品进行了结构确证。 结论 通过改进2-甲氧基雌二醇的合成工艺，简化操作，缩短反应时间，与原文献相比改进后的合成条件更温和更环保，更有利于规模化生产需要。
  
综述
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  用骨髓间充质干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的研究进展

  赵 洋 符伟国△

  . 2008, 35(4): 624-0.

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  干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的细胞。近年来干细胞移植成为治疗性血管生成的研究热点，它能够促进缺血下肢的新血管生成，适用于内科疗效不佳、下肢远端动脉流出道差而无法进行下肢搭桥的患者及年老体弱或伴发其他疾病不能接受手术的患者。这种方法临床操作简单，虽然存在移植安全性、远期治疗效果、提高临床疗效等问题，但其较传统的治疗方法有着无可比拟的优越性，且发展空间广阔。本文综述干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的有关进展。
  
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  胸膜孤立性纤维瘤的诊断和治疗

  卢春来 葛棣 纪元

  . 2008, 35(4): 632-0.

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  胸膜孤立性纤维瘤是一种罕见的间叶肿瘤，目前认为该肿瘤起源于胸膜间皮层下方的纤维母细胞。根据病理学特征，可以分为良性和恶性两类。该疾病的最佳治疗方法是完整的手术切除。本文就胸膜孤立性纤维瘤的流行病学、临床表现、影像学特征、鉴别诊断、治疗方法、病理以及预后展开综述。
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  代谢组学在肿瘤诊断应用中的新进展

  吴昊 薛如意 沈锡中△

  . 2008, 35(4): 632-0.

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  代谢组学是近几年发展起来的对某一生物或细胞所有低分子量代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科，是系统生物学的重要组成部分。本文简要介绍了代谢组学的概念和研究方法，对当前代谢组学在肿瘤诊断中的应用进展进行综述。